تولید آنتی بادی علیه پروتئین نوترکیب اتصالی فریک انتروباکتین

Authors

seyed mehdi larrie baghal

department of biology, faculty of basic sciences, shahed university, tehran, iran seyed latif mousavi gargari

department of biology, faculty of basic sciences, shahed university, tehran, iran iraj rasooli

professor, department of biology, faculty of basic sciences, shahed university, tehran, iran, p.o.code: 3319118651

abstract

هدف: باکتری اشرشیاکلی o157: h7، از زیرگروه اشرشیاکلی های خونریزی دهنده داخلی (انتروهموراژیک اشرشیاکلی) است. این باکتری تولید کننده توکسینی شبیه شیگا توکسین است که در ایجاد اسهال های خونی، غیرخونی و نشانگان یورمی همولیتیک نقش دارد. نشانگان یورمی همولیتیک یک عامل مهم ناتوانی کلیوی در کودکان و بزرگسالان است. ژن fepa از باکتری اشرشیاکلی o157:h7 با 2241 جفت باز، پروتئین غشایی به نام پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین را کد می کند که برای جذب فریک انتروباکتین در باکتری اشرشیاکلی ضروری است. در صورت ممانعت از جذب آهن توسط باکتری، می توان میزبان را از تهاجم آن ایمن نمود. در این مطالعه تأثیر ایمنی زایی پروتئین غشایی fepa بررسی شد. مواد و روش ها: به منظور تهیه پروتئین نوترکیب fepa، پس از کشت باکتری اشرشیاکلی o157:h7، ژنوم آن به روش لیز قلیایی تخلیص شد. با کمک واکنش زنجیره پلیمراز ژن fepa از اشرشیاکلی به طول 2241 جفت باز فراوان سازی و سپس روی ناقل بیانی pet28a(+) کلون شد. پس از انتقال سازه نوترکیب به میزبان اشرشیاکلی سویه bl21de3، بیان پروتئین مورد نظر توسط غلظت های مختلف ایزوپروپیل تیو بتا- دی گالاکتوزید القا و بهینه سازی شد. نتایج بیان با sds-page بررسی و پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون ni-nta تخلیص شد. در نهایت پس از تزریق پروتئین تخلیص شده به موش و تکمیل دوره ایمن سازی، تیتر آنتی بادی با سنجش الایزا ارزیابی شد. نتایج: پروتئین نوترکیب با وزن 85 کیلودالتون تولید و تخلیص شد. تزریق پروتئین به موش های balb/c نشان دهنده توان بالای آن در تحریک سیستم ایمنی و تولید آنتی بادی و نیز توان آنتی بادی تولید شده در شناسایی پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین که منجر به تقویت مقاومت موش در برابر ld50 106 است. نتیجه گیری: با توجه به توان بالای آنتی بادی نوترکیب در شناسایی پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین، امکان استفاده از این آنتی بادی در محدود کردن رشد و توسعه انتروباکتریاسه مطرح می شود.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

استفاده ازتکنولوژی پروتئین نوترکیب برای تهیه آنتی بادی اختصاصی علیه ناقل بیماری رایزومونیا در چغندرقند

بیماری ریشه‌گنایی )رایزومانیا ( از مهمترین بیماری‌های ویروسی چغندر¬قند می‌باشد. عـامـل این بیماری ویروس رگبرگ زرد نکروتیک چغندر قند می¬باشد. قارچ Polymyxa betae به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. با توجه به ماهیت پارازیت اجباری ناقل و عدم قابلیت کشت در آزمایشگاه، شناسایی گیاهان آلوده معمولا بر اساس مشاهده میکروسکوپی انجام می¬شود. در این تحقیق به منظور تسهیل در روند شناسایی، آنتی...

full text

استفاده ازتکنولوژی پروتئین نوترکیب برای تهیه آنتی بادی اختصاصی علیه ناقل بیماری رایزومونیا در چغندرقند

بیماری ریشه‌گنایی )رایزومانیا ( از مهمترین بیماری‌های ویروسی چغندر¬قند می‌باشد. عـامـل این بیماری ویروس رگبرگ زرد نکروتیک چغندر قند می¬باشد. قارچ Polymyxa betae به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. با توجه به ماهیت پارازیت اجباری ناقل و عدم قابلیت کشت در آزمایشگاه، شناسایی گیاهان آلوده معمولا بر اساس مشاهده میکروسکوپی انجام می¬شود. در این تحقیق به منظور تسهیل در روند شناسایی، آنتی...

full text

شناسایی و تولید پروتئین متصل شونده به فریک انتروباکتین (fepa)

باکتری اشرشیاکلی o157: h7 (e.coli o157: h7)، از زیر گروه اشرشیاکلی های خونریزی دهنده داخلی انترو هموراژیک {enterohemorrhagic escherichia coli (ehec) } می باشد. این باکتری تولید کننده ی توکسینی شبیه شیگا توکسین (shiga-like toxin) می باشد که در ایجاد اسهال-های خونی، غیر خونی و سندروم یورمی همولیتیک نقش دارد. سندروم یورمی همولیتیک یک عامل مهم ناتوانی کلیوی در کودکان و بزرگ سالان است. این باکتری بر...

15 صفحه اول

ارزیابی و مقایسه تیتر آنتی بادی علیه پروتئین های نوترکیب منفرد، مخلوط و کایمر CTXB، TCPA وTCPA CTXB-

Background: Cholera as diarrheal illness is one of the most important causes of death and people's disability in different societies. Colonization factor pili (tcpA) and cholera toxin are the most important factors in the pathogenesis of Vibrio Cholera. B subunit of cholera toxin (ctxB) and tcpA have the ability to induce immune responses. The aims of this study was production of CTXB, TCPA, CT...

full text

مقایسه تیتر آنتی بادی علیه پروتئین ها ی نوترکیب منفرد، مخلوط و ممزوج STxB، IpaD و STxB-IpaD

مقدمه: پروتئین IpaD نقش مهمی در تهاجم، بیماری زایی و ایجاد عفونت توسط باکتری ‌ها‌ی شیگلا و اشریشیاکلی دارد. یکی دیگر از فاکتورهای بیماریزای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1 و E.coli O157:H7 انتروتوکسین شیگلا یا (StxB) می ‌باشد. با مخلوط یا ممزوج پروتئین IpaD با STxBمی ‌توان منتخب احتمالی مناسب برای واکسن تهیه نمود. در این مطالعه ایمنی زایی و تیتر آنتی بادی ممزوجی، مخلوط و جداگانه پروتئین ‌ها‌ی نوتر...

full text

تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه ژیاردیا لامبلیا در خرگوش

چکیده مقدمه: ژیاردیا لامبلیا یکی از شایع‌ترین تک یاخته‌های روده‌ای انسان در سراسر جهان می‌باشد. تشخیص آن عمدتاً از طریق مشاهده مستقیم صورت می‌گیرد ولی روشهای مبتنی بر ELISA، IFA، بعنوان تکنیکهای برتر، کاربردهای تحقیقاتی و اپیدمیولوژیکی دارد. برای طراحی تستهای قدرتمند با قدرت تشخیصی بالا نظیر دیپ استیک و یا کیت‌های تشخیصی سریع، اولین قدم تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال می‌باشد. لذا بر آن شدیم تا آنت...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
پژوهش های آسیب شناسی زیستی

جلد ۱۲، شماره ۲، صفحات ۸۳-۹۲

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023